Трансвагинальная аспирация ооцитов (OPU) с последующим вымыванием — основа in vivo протокола для лошадей
Племенное производство лошадей всё чаще опирается на технологии, которые позволяют сохранить и передать генетику ценных кобыл без классической схемы «оплодотворение — вынашивание — флашинг эмбриона». In vivo протокол с трансвагинальной аспирацией ооцитов (OPU) даёт доступ к половым клеткам напрямую из яичника живой матки — без необходимости, чтобы кобыла была оплодотворена и вынашивала эмбрион.
Для племенных заводов, репродуктивных центров и владельцев спортивных кобыл это открывает практические возможности: получать ооциты от выдающихся донорш в удобное окно сезона, не прерывая спортивную карьеру и не перегружая матку повторными беременностями. Клетки можно витрифицировать и хранить в жидком азоте, а оплодотворение и перенос планировать по графику реципиентных кобыл и лаборатории. Критически важно, что успех всей программы начинается уже на первом лабораторном шаге — качественном вымывании ооцитов в специализированной среде. Линейка ZOOEMBRIO закрывает полный цикл после аспирации: от вымывания и отмывки до витрификации и девитрификации.
Ооциты получают от чемпионок и племенных лидеров, не нагружая их вынашиванием. Донорша может продолжать выступать, участвовать в селекционных показах или использоваться ограниченно — при этом её генетический материал остаётся доступным для программы воспроизводства.
Аспирацию планируют между стартами или вне соревновательного сезона. Процедура занимает 30–40 минут под седацией; после неё кобыла возвращается к тренировкам. Для производителей спортивного поголовья это способ совместить карьеру лошади и племенную работу.
Если классическое воспроизводство не даёт результата — хронический эндометрит, возрастные изменения, травмы половых путей, низкая оплодотворяемость — прямое получение ооцитов из яичника открывает путь к продолжению линии без отказа от ценной генетики.
Аспирацию проводят при наличии фолликулов подходящего размера, не привязываясь жёстко к одному дню овуляции. Повторные процедуры возможны с интервалом 2–3 недели. Племенной завод может распределять нагрузку на лабораторию и реципиентов в течение всего сезона.
Ооциты и эмбрионы витрифицируют и хранят в жидком азоте, перенося в удобное время — в том числе в другой регион или на следующий сезон. Это снимает необходимость жёсткой синхронизации донорской и реципиентной кобыл и упрощает логистику для крупных племенных программ.
После аспирации ооциты максимально чувствительны к составу среды, температуре и времени обработки. Правильное вымывание в TSM-Asp сохраняет морфологию клеток и задаёт успех всего последующего протокола — отмывки, витрификации и девитрификации. Именно поэтому среды для каждого этапа должны быть согласованы между собой.
Именно поэтому каждый этап после аспирации требует специализированной среды. Ниже — подробное описание каждого этапа протокола ZOOEMBRIO.
Линейка сред ZOOEMBRIO покрывает полный цикл: вымывание, отмывка, витрификация и девитрификация. Для каждого этапа — подробное описание процесса и рекомендуемая среда.
Схема аспирации ооцитов из яичника кобылы и вымывания в среде TSM-Asp
Ооцит — женская половая клетка, которая созревает во фолликуле яичника кобылы. При in vivo протоколе ооциты получают трансвагинальной аспирацией: через стенку прямой кишки вводят ультразвуковой датчик и аспирационную иглу, фолликулы пунктируют и собирают фолликулярную жидкость с клетками. Вымывание — это отделение ооцитов от этой жидкости и клеточного «мусора» в специальной среде, чтобы клетки остались жизнеспособными.
TSM-Asp поставляется в мешках для инфузий 1000 и 3000 мл — объём удобен для вымывания большого количества фолликулярной жидкости без частых переливаний.
Схема отмывки ооцитов в каплях среды Wash
После вымывания на поверхности ооцитов остаются следы фолликулярной жидкости, клеток гранулёзной оболочки и других компонентов. Отмывка — это серия кратковременных переносов клетки через свежие порции среды, чтобы удалить эти остатки и подготовить ооцит к витрификации или дальнейшему культивированию.
Wash выпускается во флаконах 50 и 100 мл — удобный формат для лабораторной работы с пипеткой и каплями на нагревательной пластине.
Набор сред ViT1 и ViT2 для витрификации эмбрионов и ооцитов
Витрификация — сверхбыстрая заморозка, при которой клетка переходит в стеклообразное состояние без образования льда. Это позволяет сохранить ооциты и эмбрионы лошадей для длительного хранения в жидком азоте (−196 °C) с высокой выживаемостью после девитрификации.
Набор ViT1 + ViT2 — двухступенчатая система: первая среда для эквилибрации, вторая — для финальной витрификации.
Набор сред WaM1 и WaM2 для девитрификации эмбрионов и ооцитов
Девитрификация — обратный процесс витрификации. Замороженный ооцит извлекают из жидкого азота, быстро нагревают и поэтапно выводят из криопротекторов в рабочую среду. Цель — восстановить жизнеспособность клетки для культивирования, оплодотворения или переноса.
Комплект WaM1 + WaM2 + WaM3 обеспечивает плавный переход клетки из витрифицированного состояния в рабочую среду без осмотического шока.
Все манипуляции выполняются с соблюдением температурного режима и стандартных лабораторных практик. Перед применением среды проходят необходимую эквилибрацию.
